中国检验检疫仪器网
您当前的位置>>仪器展厅>>
TALEN基因敲除鼠技术服务*

产品型号:

供应商报价:面议

样本:

产地:

更新时间:2016-09-28 14:02:24

分享到: 更多
  • 产品简介
  • 相关资料
  • 相关仪器
  • 相关耗材
 一、技术原理

        TALEN(Transcription Activator-Like Effector Nuclease) 技术是基于对DNA识别域 (TALEN 结合臂) 和人工改造的核酸内切酶的切割域(FokⅠ)的结合对细胞基因组进行修饰而实现的。TALEN的DNA识别域是由一些非常保守的重复氨基酸序列模块组成,每个模块由34个氨基酸组成,其中第12和13位的氨基酸种类为可变的(RVDs),且决定了该模块识别靶向位点的特异性。通过DNA识别域结合到靶位点上,以及FokI的切割域形成二聚体后,可特异性对目标基因DNA实现切断,在非同源末端连接修复过程中,DNA双链断开后会由于碱基的随机增减造成目标基因功能缺失。 该技术目前已成功应用于植物、细胞、酵母、斑马鱼及大、小鼠等各类模式动物的研究领域。

 

二、TALEN技术特点:
1、可以应用于大小鼠;无动物品系限制,永久失活;
2、成功率可达90%以上;
3、实验周期短、价格低 。

 

三、制备流程及服务周期

 

四、服务承诺
        赛业生物科技承诺提供3-4只F1代鼠。

 

五、TALEN技术流程图

        TALEN由四部分组成:N端序列,RVD,C端序列,FokI。利用Type II 限制性内切酶可以将RVDs模块分别生成不同的粘性末端,同时又不留有酶切位点, 通过一系列的相应酶切连接反应实现RVDs与TALEN骨架的无缝连接。

        TALEN系统利用FokI的内切酶活性打断目标基因。FokI形成二聚体发挥活性,在TALEN结合臂的引导下,发挥特异性内切酶活性,在两个靶位点之间剪切DNA,形成DSB(Double- Strand Breaks),诱发DNA损伤修复机制。细胞通过NHEJ(Non- homologous End Joining)修复DNA,在此修饰过程中导致删除或插入了一定数目(非3的倍数)的碱基,造成移码,形成对目标基因特异性KO的突变体。

 

 

六、Cygen利用TALEN技术成功案例:

1、Diablo KO Mouse Generation by TALEN

       C57BL/6 mouse Diablo Knockout(TALEN)

T TGATAAAACCATGGCA caaaactgtgttga CTGGATTTGGCATGAC A
TAL1 RVDs: NG NN NI NG NI NI NI NI HD HD NI NG NN NN HD NI
TAL2 RVDs: NN NG HD NI NG NN HD HD NI NI NI NG HD HD NI NN 

野生型: TTGATAAAACCATGGCACAAAACTGTGTTGACTGGATTTGGCATGACA
突变型1:TTGATAAAACCATGGCAC--------------------------TGGATTTGGCATGACA
突变型2:TTGATAAAACCATGGCACAAAACTG---TTGACTGGATTTGGCATGACA
结果说明
突变型1: 缺失14bp;
突变型2: 缺失2bp。

2、IgM KO Rat Generation by TALEN

       SD Rat IgM Knockout(TALEN)

T TCCTGCCCAGCTCCAT ttccttctcctggaact  ACCAGAACAACACTGA  A
TAL1 RVDs:NG HD HD NG NN HD HD HD NI NN HD NG HD HD NI NG 
TAL2 RVDs:NG HD NI NN NG NN NG NG NN NG NG HD NG NN NN NG  

结果:Sequencing confirmation of disruption of  the Rat IgM by TALEN

突变型1、突变型2、野生型
结果说明:
突变型1: 缺失12 bp;
突变型2: 缺失5 bp。

Instrument.com.cn Copyright @ 1999-2011,AllRights Reserved 版权所有中国检验检疫仪器网,未经书面授权,所有页面内容不得以任何形式进行复制